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    cytoskeleton-乙酰賴氨酸工具 介紹

    發(fā)布時(shí)間: 2024-05-17  點(diǎn)擊次數(shù): 1055次

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    乙酰賴氨酸工具

    概述

    翻譯后乙酰化發(fā)生在賴氨酸殘基的ε-氨基上,作為一種可逆且高度動(dòng)態(tài)的PTM,已知其是多種細(xì)胞事件的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,包括染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄、代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)。

    主要功能

    首乙酰賴氨酸研究者的優(yōu)化試劑盒

    分析細(xì)胞或組織樣品中內(nèi)源性或轉(zhuǎn)染蛋白的乙?;?/p>

    最完整的乙酰化蛋白質(zhì)圖譜

    化學(xué)計(jì)量分析帶來更深入的機(jī)理見解

    查看備受關(guān)注的Signal™Seeker工具箱的新增內(nèi)容(如下)

    新格式-信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒(目錄號(hào)BK163-S.15測(cè)定)

    新格式-信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒(目錄號(hào)BK163,30個(gè)測(cè)定)

    -信號(hào)導(dǎo)引頭乙酰賴氨酸檢測(cè)試劑盒-AAC03(目錄號(hào)BK164,30個(gè)測(cè)定)

    新格式-乙酰賴氨酸親和珠(AAC04

    乙酰賴氨酸抗體小鼠單克隆抗體

    乙酰賴氨酸小鼠單克隆抗體

    抗乙酰賴氨酸抗體是一種泛乙酰賴氨酸酯小鼠單克隆抗體,是Signal Seeker™產(chǎn)品線的一部分。抗乙酰賴氨酸抗體識(shí)別通過賴氨酸殘基的ε-胺基團(tuán)上的乙?;M(jìn)行翻譯后修飾的蛋白質(zhì),所述賴氨酸殘余基出現(xiàn)在所有蛋白質(zhì)的30-50%上,特別是組蛋白、p53、微管蛋白和肌球蛋白。使用乙?;鞍椎膶S谢旌衔飦懋a(chǎn)生高度強(qiáng)健的抗體,該抗體已被證明在IP、WB、ChIPIF應(yīng)用中識(shí)別廣泛的乙酰化蛋白。這種抗乙酰賴氨酸抗體與其他市售抗體相比具有許多優(yōu)點(diǎn),如下所示。

    已驗(yàn)證的應(yīng)用程序

    使用乙酰賴氨酸抗體的蛋白質(zhì)印跡

    細(xì)胞骨架的抗乙酰賴氨酸抗體類別#AAC01識(shí)別0.005ng化學(xué)乙?;?span>BSA,并且在靈敏度上與其他市售抗體相當(dāng)。與其他抗乙酰賴氨酸抗體不同,該抗體與非乙?;?span>BSA沒有顯示出交叉反應(yīng)性。要查看完整的蛋白質(zhì)印跡比較,請(qǐng)參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。

    乙酰賴氨酸蛋白質(zhì)印跡

    使用乙酰賴氨酸抗體的免疫沉淀

    AAC01對(duì)IP組蛋白的能力與其他市售抗體進(jìn)行比較。Cytoskeley的抗乙酰賴氨酸抗體為IP應(yīng)用提供了明顯的優(yōu)勢(shì)。每個(gè)試管足以進(jìn)行大約20IP測(cè)定。要查看完整的免疫沉淀比較,請(qǐng)參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。

    乙酰賴氨酸免疫沉淀

    使用乙酰賴氨酸抗體的免疫熒光

    將未經(jīng)處理(頂部)或用TSA5mM,12小時(shí))處理(底部)的人表皮樣癌A431細(xì)胞按本方法所述染色。乙?;募?xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白在綠色熒光中可見。注意,與未處理的對(duì)照相比,TSA處理的樣品中乙?;⒐芫W(wǎng)絡(luò)清晰可見。熒光核強(qiáng)度表明核中乙?;鞍椎呢S度很高。要查看完整的免疫熒光方案,請(qǐng)參閱優(yōu)化方案或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。

    乙酰賴氨酸IF

    使用乙酰賴氨酸抗體的ChIP

    染色質(zhì)由未處理或TSA處理(5mM,4小時(shí))的A431細(xì)胞制備。簡言之,用1%甲醛固定細(xì)胞10分鐘,并通過使用抗乙酰基抗體(1:100稀釋)免疫沉淀酶切染色單體。通過引物對(duì)擴(kuò)增管家基因GAPDH的啟動(dòng)子區(qū),并通過2%瓊脂糖凝膠電泳分析PCR產(chǎn)物。要查看推薦的ChIP協(xié)議,請(qǐng)參閱優(yōu)化協(xié)議或產(chǎn)品數(shù)據(jù)表。

    蛋白質(zhì)乙?;尘?/p>

    蛋白質(zhì)的乙?;梢宰鳛楣卜g或翻譯后修飾(PTM)發(fā)生(1)。共翻譯乙?;l(fā)生在大約85%的哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)的N-末端,它是不可逆的,被認(rèn)為在蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、定位和合成中很重要(1)。翻譯后乙?;l(fā)生在賴氨酸殘基的ε氨基上,作為一種可逆且高度動(dòng)態(tài)的PTM,已知其是多種細(xì)胞事件的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,包括染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、轉(zhuǎn)錄、代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架調(diào)節(jié)(2-3)。迄今為止,已有4000多種蛋白質(zhì)被鑒定為PTM乙酰化的靶標(biāo),這與細(xì)胞前體中的磷酸化相當(dāng)(3)。抗體AAC01檢測(cè)乙酰賴氨酸PTMs。

    乙酰賴氨酸親和珠-AAC03

    乙酰賴氨酸親和珠

    Cytoskeley提供兩種類型的乙酰賴氨酸親和珠,Cat#AAC02珠和Cat#AAC03珠。這兩種試劑都由與G蛋白珠共價(jià)連接的小鼠抗乙酰賴氨酸抗體組成,并且都富集了廣泛的乙?;鞍?。AAC02珠粒和AAC03珠??梢越M合以提供更廣泛的乙?;鞍踪|(zhì)富集譜(Cat#AAC04珠粒是AAC02珠與AAC03珠的1:1組合)。

    AAC02珠相比,AAC03珠具有重疊但獨(dú)的特異性,在檢查特定靶蛋白時(shí)可能優(yōu)于AAC02珠,請(qǐng)參閱詳細(xì)方法和驗(yàn)證應(yīng)用程序以獲取示例。由于乙?;ǔV徽伎偘械鞍椎暮苄“俜直龋虼耸褂脙?yōu)化的試劑對(duì)成功至關(guān)重要。當(dāng)檢查新的感興趣蛋白質(zhì)(POI)的乙?;癄顟B(tài)時(shí),建議分別嘗試AAC03珠和AAC02珠,以確定哪種試劑適合y

    已驗(yàn)證的應(yīng)用程序

    應(yīng)用1:檢測(cè)目標(biāo)POI中的乙?;兓?/p>

    AAC03珠已被證明是乙酰化EGFRRhoGDI靶標(biāo)POI免疫沉淀的優(yōu)良試劑(圖1)。在HDAC抑制劑存在的情況下,AAC03-IP顯示EGFRRhoGDI的乙?;謩e增強(qiáng)11.3倍和2.5倍。而AAC02 Bead分別表現(xiàn)出較弱的8倍和1.1倍的增長。

    1圖例:AAC03珠粒和AAC02珠粒(50µl珠漿)和1:1混合物(各25µlAAC04珠粒用于脫乙酰酶抑制劑[TSA1µM)和煙胺(1mM]處理(+)或未處理(-)的Cos-7細(xì)胞的乙?;鞍?span>IP 6小時(shí)。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗體進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析,并使用LiCor-Empiria軟件對(duì)信號(hào)進(jìn)行定量。還進(jìn)行IP測(cè)定,并對(duì)小鼠IgG對(duì)照珠的信號(hào)進(jìn)行定量(印跡未顯示)。每個(gè)IP使用1 mg裂解物。

    應(yīng)用2:總乙酰賴氨酸圖譜的免疫沉淀

    AAC03珠顯示出強(qiáng)大的總乙?;?span>IP圖譜,與AAC02珠具有重疊但特異性圖譜。AAC03珠可以單獨(dú)使用,也可以與AAC02珠組合使用來研究乙?;M。

    2圖例:使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠(50µl珠漿)對(duì)用脫乙酰酶抑制劑[TSA1µM)和煙胺(1mM]處理(+)或未處理(-)的Cos-7細(xì)胞的乙酰化蛋白進(jìn)行IP處理6小時(shí)。用AAC03-HRP抗體(1:3000)洗脫并通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的乙?;鞍椎目倛D譜。使用小鼠IgG珠作為非特異性結(jié)合的對(duì)照(Cat#CIG02)。每次IP測(cè)定使用1 mg Cos-7裂解物

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