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    alpco試劑問題與解答

    發(fā)布時間: 2023-02-15  點(diǎn)擊次數(shù): 845次

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    alpco問題與解答

    所有孔變?yōu)榱了{(lán)色用于比色測定

    鋼板清洗不足

    對于自動清洗機(jī):檢查噴嘴是否堵塞,驗(yàn)證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息,請參閱用戶手冊。

    對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機(jī),特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

    不要跳過清洗或浸泡步驟。如果不在SA-HRP和底物步驟之間清洗,將導(dǎo)致所有井顯示非常高的信號。

    酶綴合物污染底物

    確保所有容器清潔且標(biāo)記清晰。檢查TMB是否為藍(lán)色。如果TMB變?yōu)樗{(lán)色,請不要在化驗(yàn)中使用,并聯(lián)系產(chǎn)品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個組分。

    高背景(空白或0標(biāo)準(zhǔn)值過高)

    鋼板清洗不足

    對于自動清洗機(jī):檢查噴嘴是否堵塞,驗(yàn)證分配量,并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關(guān)更多維護(hù)信息,請參閱用戶手冊。

    對于手動沖洗:確保所有井都用沖洗緩沖液強(qiáng)制過滿。避免使用多通道移液管進(jìn)行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機(jī),特別是在進(jìn)行化學(xué)發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術(shù)的視頻。

    不要跳過清洗或浸泡步驟。

    舊的或受污染的洗滌緩沖液

    清洗緩沖液存放時間過長或留在自動清洗管中會導(dǎo)致污染。根據(jù)需要準(zhǔn)備新鮮的洗滌緩沖液,并定期清潔自動洗滌設(shè)備。

    酶綴合物污染底物

    確保所有容器清潔且標(biāo)記清晰。檢查TMB是否為藍(lán)色。如果TMB變?yōu)樗{(lán)色,請不要在化驗(yàn)中使用,并聯(lián)系產(chǎn)品支持人員。使用前不要將基材暴露在陽光下。使用新的試劑容器添加每個組分。

    錯誤的共軛稀釋

    高于正常濃度可能導(dǎo)致背景升高。檢查殘余體積并確認(rèn)綴合物制備正確。

    讀板器中使用了錯誤的過濾器

    確認(rèn)在讀取銘牌時使用了協(xié)議中指示的正確過濾器。包括使用說明中所示的建議減去空白或OD讀數(shù)。

    標(biāo)準(zhǔn)品和樣品無顯色或OD讀數(shù)非常低

    讀板器中使用了錯誤的過濾器

    確認(rèn)在讀取銘牌時使用了協(xié)議中指示的正確過濾器。

    試劑配制錯誤

    確保所有容器都有清晰的標(biāo)記,并將適當(dāng)?shù)臐饪s液和稀釋劑添加到正確的小瓶中,以使每個“工作"成分用于分析。

    試劑混合不充分

    使用前,讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內(nèi)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備(渦流混合器等)確保試劑在使用前是均勻的。

    板材晃動不足

    不正確的搖動運(yùn)動會導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運(yùn)動振動器。參見示例。

    試劑中的混合

    如果一次運(yùn)行多個分析,請將試劑分開以避免混淆。在向分析板添加試劑之前,仔細(xì)檢查試劑標(biāo)簽。

    試劑被污染或添加順序錯誤

    驗(yàn)證所有化驗(yàn)成分的外觀、儲存條件和有效期。按照協(xié)議中的步驟進(jìn)行操作。確保按正確順序添加每個組件。

    使用了備用部件批次或過期部件

    某些組件具有高度的批次特異性。務(wù)必與制造商核實(shí)是否使用了備用部件批次。不要使用過期的試劑。

    未正確遵循分析培養(yǎng)時間

    遵循方案中所示的培養(yǎng)時間和溫度。降低任一因素都會影響測定動力學(xué),并可能導(dǎo)致低信號。如果方案列出了TMB培養(yǎng)的時間范圍,則確保在建議的最長時間內(nèi)培養(yǎng)試驗(yàn)。

    延遲讀取板材

    如果進(jìn)行化學(xué)發(fā)光ELISA,則應(yīng)在短時間內(nèi)讀取平板。有關(guān)套件特定時間,請參閱協(xié)議。延遲讀取印版會導(dǎo)致信號降低。

    僅樣品無顯色或OD讀數(shù)非常低

    實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的錯誤

    調(diào)查樣品來源。如果可能,使用替代方法測試樣品,以確認(rèn)樣品在工作測定范圍內(nèi)對感興趣的生物標(biāo)志物應(yīng)為陽性。當(dāng)刺激生物標(biāo)志物生產(chǎn)時,可能需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

    樣品處理不正確

    確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時間暴露。驗(yàn)證樣品未經(jīng)歷重復(fù)的凍融循環(huán)。如果可能,在≤-70°C的溫度下等分并儲存樣品。

    樣本稀釋計(jì)算錯誤

    驗(yàn)證樣品稀釋度是否正確。如有必要且在試劑盒規(guī)格范圍內(nèi),以較高濃度(較低稀釋度)重新測試樣品。

    未驗(yàn)證的樣本類型

    未經(jīng)驗(yàn)證的樣品類型可能與試劑盒的測定緩沖液或測定范圍不兼容。

    板材晃動不足

    不正確的搖動運(yùn)動會導(dǎo)致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運(yùn)動振動器。參見示例。

    控制超出范圍

    試劑處理不正確

    確保試劑已正確儲存和處理,且在有效期內(nèi)。注意,一些試劑在重構(gòu)后的保質(zhì)期有限。

    標(biāo)準(zhǔn)曲線差

    驗(yàn)證是否使用了適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)曲線,并對照先前分析的值和分析證書中給出的值檢查結(jié)果。有關(guān)更多信息,請參閱“較差標(biāo)準(zhǔn)曲線"部分。注:對于化學(xué)發(fā)光測定,不同的化學(xué)發(fā)光讀數(shù)器的RLU可能會有很大差異。

    標(biāo)準(zhǔn)品和/或?qū)φ掌分貥?gòu)錯誤

    有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品和對照品重構(gòu)的正確體積和緩沖液,請參見方案和批次特定分析證書。使用前,讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內(nèi)。使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備(渦流混合器等)確保試劑在使用前是均勻的。

    使用了錯誤的曲線擬合

    使用方案中建議的曲線擬合。如果提供了多個建議,請使用適合標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)點(diǎn)的回歸方法。強(qiáng)烈建議使用帶有4參數(shù)和5參數(shù)回歸選項(xiàng)的軟件程序。

    樣本的意外結(jié)果

    樣品制備不當(dāng)

    按照方案中的方法進(jìn)行適當(dāng)?shù)臉悠分苽?。確保樣品未在室溫或冷藏條件下長時間暴露。驗(yàn)證樣品未經(jīng)歷重復(fù)的凍融循環(huán)。如果可能,在≤-70°C的溫度下等分并儲存樣品。

    樣本ID混淆

    檢查樣本ID,以確認(rèn)其已正確標(biāo)記并添加到平板上。

    樣品稀釋誤差

    如有必要,驗(yàn)證樣品稀釋度是否正確,外推的樣品值是否與正確的稀釋系數(shù)相乘。

    報告單位的差異

    驗(yàn)證報告的計(jì)量單位與分析的計(jì)量單位一致。執(zhí)行任何必要的換算計(jì)算。當(dāng)比較不同試劑盒中獲得的值時,如果有參考標(biāo)準(zhǔn),確保校正化驗(yàn)校準(zhǔn)中的任何差異。

    實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的錯誤

    調(diào)查樣品來源。如果可能,使用替代方法測試樣本,以確認(rèn)預(yù)期樣本值。當(dāng)刺激生物標(biāo)志物生產(chǎn)時,可能需要調(diào)整實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

    干擾物質(zhì)

    考慮與樣本基質(zhì)(如使用抗凝劑)、臨床診斷(如類風(fēng)濕因子)或治療相關(guān)的潛在干擾物質(zhì)。

    特異性

    由于糖基化、蛋白質(zhì)折疊和抗體特異性的差異,不同系統(tǒng)(大腸桿菌、酵母、哺乳動物細(xì)胞系)中表達(dá)的天然蛋白質(zhì)和重組蛋白質(zhì)的識別可能有所不同。不同供應(yīng)商的套件可能會有不同的認(rèn)可度。

    含量漂移:從板開始到結(jié)束的值差異

    因重組或稀釋導(dǎo)致的延遲

    在開始化驗(yàn)工作流程之前,準(zhǔn)備好標(biāo)準(zhǔn)品、對照品和稀釋樣品。

    試劑不在溫度下

    在開始化驗(yàn)前,確保所有所需試劑處于使用說明書中規(guī)定的室溫。

    向第一口井和最后一口井添加試劑之間的延長時間

    如果可能,在稀釋板或微量滴定管中制備標(biāo)準(zhǔn)品和對照品,然后使用多通道移液管轉(zhuǎn)移至測定板。使用試劑容器和多通道移液管將常用試劑添加到測定板中。

    批間變異性(對照品或在不同平板上測試的樣品的精度差)

    操作員間可變性

    觀察試劑制備、移液技術(shù)和測定時間的差異。

    移液管校準(zhǔn)的差異

    移液管校準(zhǔn)的差異可能會導(dǎo)致可變性,特別是在移液量較小時。

    儀器儀表的差異

    當(dāng)在同一天或不同的日子在多個平板上測試樣品或?qū)φ掌窌r,應(yīng)在相同的設(shè)置下使用相同的平板振動器、平板清洗器和平板讀取器。

    環(huán)境條件的變化

    注意溫度的差異。請記住,一般室溫、靠近窗戶(尤其是在非常寒冷或非常晴朗的日子)以及靠近可能會散發(fā)熱量的儀器可能會影響化驗(yàn)溫度。

    樣品處理的差異

    額外的凍融循環(huán)或在室溫或冰箱中增加的時間可能會影響樣品結(jié)果。

     

     

     

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